방법 1: 추출법(현재 우리나라에서 사용하고 있는 방법으로 순도는 낮으나 생산원가가 저렴하다.)
옥시토신용액추출 : 건조된 뇌하수체후엽분말 100g과 석영분말 30g을 취하여 볼밀에 넣고 증류수를 첨가한다. 동일한 절차를 사용하여 추출을 4회 수행합니다. 각 단계에 첨가된 증류수의 양은 다음과 같습니다: 처음 두 번의 추출에는 1.4L, 이후 두 번의 추출에는 1.3L입니다. 각 추출은 45분 동안 수행한 후 원심분리하여 액체를 수집합니다. 나머지 잔류물은 추가 추출을 거칩니다. 4개의 결과 추출물을 합하여 옥시토신 용액을 생성합니다. 요약: 건조된 뇌하수체 후엽 분말[물, 볼밀] → 옥시토신 추출물 → 크로마토그래피 분리.
전처리된 합성 제올라이트 1,500g을 취하여-0.25% 아세트산 용액 20L를 넣고-저어준 후-이온-교환 컬럼에 붓는다. 아세트산 용액 수준이 제올라이트 베드 표면 위 2~3cm 지점으로 떨어지면 즉시 옥시토신 추출물을 첨가합니다. 적절한 유속을 유지하고 생성된 흰색 탁한 용출액을 수집합니다(이 분획에는 주로 옥시토신이 포함되어 있습니다. 옥시토신의 등전점 [pI]은 7.7-인 반면 바소프레신의 pI는 10.9입니다. 바소프레신은 쉽게 양이온을 형성하여 컬럼에 흡착됩니다. 추출물의 액체 수준이 제올라이트 베드 표면으로 떨어지자마자 즉시 증류수를 추가하고 흐름이 멈출 때까지 탁한 용출액을 계속 수집합니다. 빙하 아세트산을 사용하여 수집된 탁한 용출액의 pH를 3.5로 조정합니다. 이 용액을 수욕에서 95도까지 급속히 가열하고 이 온도를 3분간 유지한 후 급속 냉각하여 밤새 냉장보관한다. 요약하면 옥시토신 추출물 [HAc, Synthetic Zeolite Column] → 탁한 용출액 [HAc, 가열] → 분리된 용액 → 흡착 및 용출입니다. 다음날 냉장보관한 용액을 여과합니다. 여액에 10% 벤토나이트 슬러리를 교반하면서 첨가한다(여액 100mL당 슬러리 3mL 첨가). 흡착을 촉진하기 위해 1시간 동안 계속 저어준 후 혼합물을 원심분리합니다. 설포살리실산 시약 용액을 사용하여 상청액을 테스트합니다. 침전물이 없으면 흡착 과정이 완료되었음을 나타냅니다. 흡착이 불완전한 경우 벤토나이트 처리 과정을 반복하십시오. 이어서, 두 흡착 단계에서 얻은 벤토나이트 침전물을 결합합니다. 벤토나이트는 1% 아세트산(각각 1.6L, 1.4L, 1.2L 및 0.8L의 부피)을 사용하여 4회 용출됩니다. 각 용출액에 대해 용액이 80도까지 가열되면 *tert*-부틸트리클로라이드를 첨가합니다. 그런 다음 온도를 95도까지 올리고 25도까지 급속 냉각한 다음 여과하거나 원심분리합니다. 4개의 결과 여과액을 합하여 효능과 바소프레신 한계를 결정합니다. 공정 흐름은 다음과 같습니다: 냉장 용액[여과] → 여과액[벤토나이트 슬러리] → 흡착물[1% HAc] → 용출액. 옥시토신 주사의 준비:
품질 기준을 충족한 분석된 옥시토신 용액을 5 U/mL 또는 10 U/mL의 농도로 희석합니다. 그런 다음 No. 4 또는 No. 5 소결 유리 깔때기를 통해 여과하고 앰플에 채우고 100도에서 30분간 흐르는 증기를 사용하여 멸균하여 최종 제품을 얻습니다. 공정 흐름은 다음과 같습니다: 옥시토신 용액(분석 승인) [여과, 충진, 멸균] → 옥시토신 주입.
합성 제올라이트 재생: 합성 제올라이트를 증류수로 2회 세척합니다. 이어서 물(제올라이트 500g 기준으로 환산) 1.5L와 염화나트륨 150g을 첨가하고 2시간 동안 교반하여 씻어내어 바소프레신을 제거한다. 그런 다음 염화물 이온이 더 이상 남지 않을 때까지 제올라이트를 증류수로 세척합니다. 적당량의 물을 첨가하고 수산화나트륨을 사용하여 pH를 9로 조정하고; 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 상청액을 따라낸다. 제올라이트를 증류수로 세척하고 황산을 사용하여 pH를 5.5~6으로 조정한 후 거의 중성이 될 때까지 물로 다시 세척합니다. 그런 다음 여과하여 과도한 물을 제거하고 향후 사용을 위해 105도에서 건조합니다. 사용 전 적당량의 물을 첨가하고, 침지되도록 교반하면서 빙초산을 이용하여 pH를 조절한다. 10% 벤토나이트 슬러리 제조: 벤토나이트와 물을 질량-대-부피 비율 1:10으로 혼합합니다. 혼합물을 약 1시간 동안 분쇄하고, 이 시간 동안 아세트산을 첨가하여 3.5의 안정적인 pH를 유지합니다. 생성된 슬러리는 나중에 사용할 수 있도록 냉장고에 보관됩니다. 방법 2: 화학 합성. 먼저, 헵타펩티드 아미드(부분 3~9)는 벤질옥시카르보닐-류신 *p*-니트로페닐 에스테르로부터 시작하여 합성됩니다. 다음으로 벤질옥시카보닐-S-벤질시스테인-티로신 아자이드(부분 1~2)가 합성됩니다. 세 번째 단계에서는 옥시토신이 합성됩니다.